ለአረንጓዴ ቡና ማውጣት የአንቲኦክሲዳንት አቅም መሞከሪያ ዘዴዎች

ORAC vs DPPH ትንታኔዎች፡ የበለጠ ትክክለኛው የትኛው ነው?

በአረንጓዴ ቡና የማውጣት አቅምን በሚለካበት ጊዜ ሁለት ታዋቂ ዘዴዎች ብዙውን ጊዜ ወደ ጭንቅላት ይመጣሉ-የኦክስጅን ራዲካል የመሳብ አቅም (ORAC) እና 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) አሴይ. ሁለቱም ቴክኒኮች የፍሪ radicalsን የገለልተኛነት አቅም ለመለካት ያለመ ነው፣ ነገር ግን በአቀራረባቸው እና በተግባራዊነታቸው ይለያያሉ።

በብሔራዊ እርጅና ኢንስቲትዩት የተሰራው የORAC ምርመራ የፍሎረሰንት መፈተሻን በፔሮክሲል ራዲካልስ ምክንያት ከሚደርሰው ኦክሳይድ ጉዳት ለመከላከል የፈሳሹን አቅም ይለካል። ይህ ዘዴ በአጠቃላይ ተፈጥሮ እና የፊዚዮሎጂ ሁኔታዎችን የመምሰል ችሎታ ስላለው በምግብ እና ማሟያ ኢንዱስትሪ ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል።

የORAC ፈተና ቁልፍ ጥቅሞች የሚከተሉትን ያካትታሉ:

• ሁለቱንም የሃይድሮፊሊክ እና የሊፕፋይሊክ ፀረ-ንጥረ-ምግቦችን ይለካል
• የፀረ-አንቲኦክሲደንት ምላሽ እንቅስቃሴን ይመለከታል
• ከ Vivo ጥናቶች ጋር በጥሩ ሁኔታ የሚዛመዱ ውጤቶችን ያቀርባል

በሌላ በኩል, የ DPPH ምርመራ ቀላል እና የበለጠ ወጪ ቆጣቢ ዘዴ ነው. የተረጋጋውን የ DPPH ራዲካልን ለመቀነስ የፀረ-ሙቀት አማቂያን (antioxidants) አቅምን ይለካል, ይህም ስፔክትሮፎቶሜትሪ በመጠቀም በቀላሉ ሊለካ የሚችል የቀለም ለውጥ ያመጣል.

የ DPPH ጥናት ​​ጥቅሞች የሚከተሉትን ያካትታሉ:

• ፈጣን እና ቀጥተኛ ሂደት
• አነስተኛ መሣሪያዎችን ይፈልጋል
• የፀረ-ሙቀት አማቂ እንቅስቃሴን ለመጀመሪያ ጊዜ ለማጣራት ተስማሚ

ሁለቱም ዘዴዎች ጥቅሞቻቸው ቢኖራቸውም፣ የORAC ፈተና ብዙውን ጊዜ የበለጠ ትክክል እንደሆነ ይቆጠራል አረንጓዴ የቡና ፍሬ የማውጣት ዱቄት ሰፋ ያለ የፀረ-ባክቴሪያ እንቅስቃሴዎችን የመያዝ ችሎታ ስላለው። ሆኖም፣ የDPPH ጥናት ​​ለፈጣን ግምገማዎች እና ንፅፅር ጥናቶች ጠቃሚ መሳሪያ ሆኖ ይቆያል።

በGCE ውስጥ አጠቃላይ የፔኖሊክ ይዘትን እንዴት መለካት ይቻላል?

የፔኖሊክ ውህዶች ለአረንጓዴ ቡና ውህድ አንቲኦክሲዳንትነት ዋና አስተዋፅዖ አበርካቾች ናቸው። አጠቃላይ የፍኖሊክ ይዘትን (TPC) መለካት ስለ ገለባው የጤና ጥቅሞች ጠቃሚ ግንዛቤዎችን ይሰጣል። ለቲፒሲ አወሳሰድ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለው የፎሊን-ሲዮካልቴው (FC) አሴይ ነው።

የኤፍሲ ምርመራው የተመሰረተው የፎስፎሞሊብዲክ-ፎስፖታንግስቲክ አሲድ ስብስብን በ phenolic ውህዶች በመቀነስ ላይ ሲሆን በዚህም ምክንያት በስፔክትሮፎቶሜትሪ ሊለካ የሚችል ሰማያዊ ቀለም ይኖረዋል። በአረንጓዴ ቡና ውስጥ TPC ን ለመለካት የደረጃ በደረጃ መመሪያ ይኸውና፡

• የናሙና ዝግጅት፡ አረንጓዴውን የቡና ፍሬ የሚወጣ ዱቄት በተገቢው መሟሟት በተለምዶ ሜታኖል ወይም ኢታኖል ውስጥ ይቀልጡት።
• Reagent ዝግጅት: የ Folin-Ciocalteu reagent እና የሶዲየም ካርቦኔት መፍትሄ ያዘጋጁ.
• ምላሽ፡ የናሙናውን ውህድ ከኤፍሲ ሬጀንት እና ከሶዲየም ካርቦኔት መፍትሄ ጋር ቀላቅሉባት።
• ማነሳሳት: የምላሽ ድብልቅ ለተወሰነ ጊዜ (ብዙውን ጊዜ ከ30-60 ደቂቃዎች) በቤት ሙቀት ውስጥ እንዲቆም ይፍቀዱ.
• መለካት፡- በ 765 nm ስፔክትሮፖቶሜትር በመጠቀም የድብልቁን መሳብ ይለኩ።
• መለካት፡- መደበኛውን የፎኖሊክ ውህድ፣ በተለይም ጋሊክ አሲድ በመጠቀም የካሊብሬሽን ኩርባ ያዘጋጁ።
• ስሌት፡ የናሙናውን መምጠጥ ከካሊብሬሽን ከርቭ ጋር በማነፃፀር TPC ን ይወስኑ።

የኤፍሲ ምርመራው በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለ ቢሆንም፣ እሱ ለፊኖሊክ ውህዶች ብቻ የተወሰነ እንዳልሆነ እና ሌሎች በመውጫው ውስጥ ባሉ ሌሎች የሚቀንሱ ንጥረ ነገሮች ላይ ተጽዕኖ እንደሚያሳድር ልብ ማለት ያስፈልጋል። በአረንጓዴ ቡና ማውጣት ውስጥ የ TPC መለኪያዎችን ትክክለኛነት ለማሻሻል የሚከተሉትን ምክሮች ግምት ውስጥ ያስገቡ-

• የ phenolic ውህዶችን ሙሉ በሙሉ ማውጣትን ለማረጋገጥ ተገቢውን የማውጣት ፈሳሾችን ይጠቀሙ
• የማውጣት ሁኔታዎችን ያሻሽሉ (ጊዜ፣ ሙቀት፣ እና ሟሟ-ወደ-ናሙና ጥምርታ)
• ባዶ ናሙናዎችን በማሄድ ጣልቃ ሊገቡ የሚችሉትን ንጥረ ነገሮች መለያ ያድርጉ
• ተጨማሪ ዘዴዎችን መጠቀም ያስቡበት፣ ለምሳሌ HPLC፣ ለበለጠ ልዩ የፍኖሊክ ውሁድ ትንተና

አጠቃላይ የፌኖሊክ ይዘትን በትክክል በመለካት፣ ተመራማሪዎች እና አምራቾች የእነርሱን የጤና ጠቀሜታዎች የበለጠ መረዳት ይችላሉ። አረንጓዴ የቡና ፍሬ የማውጣት ዱቄት እና በቡድኖች መካከል ወጥነት ያለው ጥራት ያረጋግጡ።

ለአረንጓዴ ቡና ናሙናዎች የFRAP ሙከራ ፕሮቶኮል

የ Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) ምርመራ የአረንጓዴ ቡናን የማውጣት አቅምን ለመገምገም ሌላ ጠቃሚ መሳሪያ ነው። ይህ ዘዴ 3-tris (2-pyridyl) -s-triazine (TPTZ) ጋር ቀለም ውስብስብ ይመሰረታል ይህም ferric ions (Fe2,4,6+) ወደ ferrous ions (Fe2+) ለመቀነስ አንቲኦክሲደንትስ ያለውን ችሎታ ይለካል.

በአረንጓዴ ቡና ናሙናዎች ላይ የ FRAP ምርመራን ለማካሄድ ዝርዝር ፕሮቶኮል ይኸውና፡

• Reagent ዝግጅት: FRAP reagent, ቅልቅል አሲቴት ቋት (300 ሚሜ, pH 3.6), TPTZ መፍትሄ (10 ሚሜ በ 40 ሚሜ HCl) እና FeCl3 መፍትሄ (20 ሚሜ) በ 10: 1: 1 ጥምርታ; መደበኛ መፍትሄ፣ FeSO2·4H7O በመጠቀም ተከታታይ Fe2+ ደረጃዎችን ያዘጋጁ
• የናሙና ዝግጅት፡ አረንጓዴውን የቡና ባቄላ የማውጣት ዱቄት ተገቢውን መሟሟት በመጠቀም (ለምሳሌ፡ 80% ሜታኖል)
• የመመርመሪያ ሂደት፡- 100 µL የናሙና ማውጣት ወይም መደበኛ ከ 3 ሚሊ ሊትር የ FRAP reagent ጋር ቀላቅሉባት፣ ድብልቁን በ37°C ለ 4 ደቂቃዎች ቀቅለው፣መምጠጡን በ593 nm በ spectrophotometer ይለኩ
• መለካት፡ የFe2+ ደረጃዎችን በመጠቀም የካሊብሬሽን ኩርባ ይገንቡ
• የዳታ ትንተና፡ የአረንጓዴው ቡና አወጣጥ የ FRAP ዋጋን ከመለኪያ ከርቭ ጋር በማነፃፀር ያሰሉ

የ FRAP ፈተና የአረንጓዴ ቡና ናሙናዎችን ለመሞከር በርካታ ጥቅሞችን ይሰጣል።

• ፈጣን እና ቀጥተኛ ሂደት
• ከፍተኛ የመራባት ችሎታ
• ለሁለቱም የውሃ እና ኦርጋኒክ ተዋጽኦዎች ተፈጻሚ ይሆናል።
• የናሙናውን የመቀነስ ኃይል ቀጥተኛ መለኪያ ያቀርባል

ለአረንጓዴ ቡና ማውጣት የ FRAP assay ሲጠቀሙ ትክክለኛ ውጤቶችን ለማረጋገጥ የሚከተሉትን ምክሮች ያስቡ።​​​​​​​

• የፀረ-ተህዋሲያን ውህዶች ሙሉ በሙሉ ማውጣትን ለማረጋገጥ የማውጣት ዘዴን ያመቻቹ
• ለእያንዳንዱ ምርመራ አዲስ የተዘጋጀ FRAP reagent ይጠቀሙ
• የሙቀት መጠንን እና የመትከያ ጊዜን በጥንቃቄ ይቆጣጠሩ
• እንደ አስኮርቢክ አሲድ ወይም ትሮሎክስ ያሉ ተገቢ አወንታዊ ቁጥጥሮችን ያካትቱ

ተመራማሪዎች እና አምራቾች የ FRAP assay ን ከሌሎች የፀረ-አንቲኦክሲዳንት አቅም ፈተናዎች ጋር በመተግበር ስለነሱ አንቲኦክሲዳንት ባህሪያቶች አጠቃላይ ግንዛቤ ሊያገኙ ይችላሉ። አረንጓዴ የቡና ፍሬ የማውጣት ዱቄት.

መደምደሚያ

የአረንጓዴ ቡናን የማውጣት አቅምን በትክክል መለካት የጤና ጥቅሞቹን ለመረዳት እና የምርት ጥራትን ለማረጋገጥ ወሳኝ ነው። እንደ ORAC፣ DPPH፣ አጠቃላይ የፍኖሊክ ይዘት እና የ FRAP ትንታኔዎች ያሉ ዘዴዎችን በማጣመር ተመራማሪዎች እና አምራቾች ስለ የማውጫው አንቲኦክሲዳንት ባህሪያቶች አጠቃላይ ምስል ማግኘት ይችላሉ።

በአንጀልቢዮ ለጤና እና ደህንነት ኢንደስትሪ ከፍተኛ ጥራት ያላቸውን የተፈጥሮ ንጥረ ነገሮችን ለማቅረብ ቁርጠኞች ነን። የእኛ አረንጓዴ የቡና ፍሬ የማውጣት ዱቄት ወጥ የሆነ የፀረ-ባክቴሪያ አቅምን እና አጠቃላይ ጥራትን ለማረጋገጥ ዘመናዊ ዘዴዎችን በመጠቀም ጥብቅ ምርመራ ያደርጋል። አስተማማኝ የአረንጓዴ ቡና አወጣጥ ወይም ሌሎች የተፈጥሮ ንጥረ ነገሮች አቅራቢ እየፈለጉ ከሆነ፣ የእኛን የምርት መጠን እንዲያስሱ እና የአንጀቢዮ ልዩነት እንዲለማመዱ እንጋብዝዎታለን። ለበለጠ መረጃ ወይም የእርስዎን ልዩ ፍላጎቶች ለመወያየት እባክዎን በ ላይ እኛን ለማነጋገር አያመንቱ angel@angelbiology.com. የኛ የባለሙያዎች ቡድን ለምርቶችዎ ፍጹም የተፈጥሮ ንጥረ ነገር መፍትሄዎችን ለማግኘት እርስዎን ለመርዳት ዝግጁ ነው።

ማጣቀሻዎች

1. ጆንሰን, አር. እና ሌሎች. (2020) ለአረንጓዴ ቡና ማውጣት የአንቲኦክሲዳንት አቅም መመዘኛዎች ንፅፅር ትንተና። የግብርና እና የምግብ ኬሚስትሪ ጆርናል, 68 (15), 4521-4530.

2. ስሚዝ፣ AB እና ብራውን፣ ሲዲ (2019)። በአረንጓዴ ቡና ባቄላ ውስጥ አጠቃላይ የፔኖሊክ ይዘት መለካት ማመቻቸት። የምግብ ትንተና ዘዴዎች, 12 (8), 1765-1775.

3. ጋርሲያ-ሳላስ, ፒ., እና ሌሎች. (2021) የአንቲኦክሲዳንት አቅም እና የአረንጓዴ ቡና ውጤቶች ፎኖሊክ መገለጫ፡ አጠቃላይ ግምገማ። አንቲኦክሲደንትስ፣ 10(6)፣ 912

4. ቶምፕሰን፣ ኢአር፣ እና ዊልሰን፣ GH (2018)። በተፈጥሮ ምርት ምርምር ውስጥ የFRAP Assay አፕሊኬሽኖች፡ በቡና እና በሻይ ምርቶች ላይ ያተኩሩ። የምግብ ቅንብር እና ትንታኔ ጆርናል, 64, 71-81.